精子質(zhì)量檢測試劑盒(流式細胞儀法)

--男性生育能力檢測指標

樣本類型：新鮮精液

校準品：請根據(jù)所用流式細胞儀型號選用廠家要求配套的校準品

質(zhì)控品：請根據(jù)所用流式細胞儀型號選用廠家推薦的質(zhì)控品

配套儀器：中生BioCyte、FlowCyte/ZS-AE7S、FACSCantoII、FACSCalibur、DxFLEX、Navios、NovoCyte、BriCyte E6等流式細胞儀

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指標簡介

精子質(zhì)量檢測是診斷男性不育癥的重要手段，流式細胞術(shù)與常規(guī)檢測方法相比，不僅具有快速、精確的優(yōu)點，還可以了解精子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和功能，是評價精子質(zhì)量的有效方法。流式細胞術(shù)(flowcytomety,FCM)應(yīng)用于精子質(zhì)量檢測，為精子內(nèi)部結(jié)構(gòu)和功能的檢測提供了一個新的途徑和前景。

檢測原理

流式細胞儀法：待測樣本的細胞懸液，在鞘液的包圍和約束下，細胞排成單列高速由流動室噴嘴噴出，形成細胞液柱。當液柱通過檢測區(qū)，在入射的激光束照射下產(chǎn)生前向角散射光（FSC）和側(cè)向角散射光（SSC），它們分別反映細胞大小和顆粒度，根據(jù)這些特性可以將細胞分類。經(jīng)一種或幾種特殊熒光標記的樣本，在激光束的激發(fā)下所產(chǎn)生的特定熒光，可被光學系統(tǒng)檢測并輸送到計算機進行分析，得到細胞相應(yīng)的各種特性。
（一）精子DNA碎片檢測原理：受損的 DNA 再酸的作用下變形成單鏈，吖啶橙（AO）與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出綠色熒光，與單鏈DNA結(jié)合發(fā)出紅光或黃光，通過軟件分析斷裂DNA的精子細胞百分比。
（二）線粒體膜電位檢測原理：精子線粒體為精子運動提供能量，線粒體內(nèi)膜的膜電位(MMP), 即線粒體通過呼吸鏈所形成的電化學梯度，是反應(yīng)線粒體功能的重要指標。MMP正常的精子JC-1 形成J2聚體，發(fā)橙色熒光， MMP降低時，JC-1以單體形式存在，發(fā)綠色熒光。
（三）精子頂體檢測原理：在受精過程中，精子發(fā)生頂體反應(yīng)，釋放頂體酶，穿入卵細胞進行受精，完整的頂體結(jié)構(gòu)是精卵結(jié)合的基礎(chǔ)，其發(fā)育和功能障礙會影響受精能力。誘發(fā)頂體反應(yīng)率檢測通過Ca²+載體體外誘導精子發(fā)生頂體反應(yīng)，完整的頂體可以結(jié)合PSA-FITC；發(fā)生頂體反應(yīng)后的精子具有不完整的頂體，不結(jié)合或很少結(jié)合PSA，通過流式細胞儀檢測相應(yīng)的熒光，熒光強度與精子頂體完整性呈正比，與誘發(fā)頂體反應(yīng)率(AR)呈反比。
（四）精子活性氧檢測原理：生理濃度的活性氧有助于精子獲能和頂體反應(yīng)，但高濃度的ROS則會造成精子DNA的損傷，導致精子DNA產(chǎn)生單鏈或雙鏈的斷裂。DCFH-DA是氧敏感性熒光探針，本身沒有熒光，可自由穿過細胞膜，進入細胞后，可以被細胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。細胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內(nèi)活性氧的水平。

臨床應(yīng)用

(一)精子DNA碎片檢測項目

精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性對于精確傳遞遺傳物質(zhì)至關(guān)重要。精子DNA損傷能夠影響精子的受精能力、受精卵的分裂、胚胎的發(fā)育以及子代健康。精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析(SCSA)是檢測精子DNA完整性的一種方法。研究顯示DFI與PR、精子濃度、精子正常形態(tài)率、精子存活率均呈負相關(guān)性。提示DFI與精子活力、形態(tài)等存在一定的相關(guān)性，PR、精子濃度、正常形態(tài)率、存活率會隨著DFI的增高而降低。但并不能完全說明精子形態(tài)正常率、存活率降低，就會損傷精子DNA，但受損的精子DNA會對精子的受精能力造成影響，從而對胚胎發(fā)育起到抑制作用。綜上所述，DFI增高與不育癥的發(fā)生聯(lián)系密切，DFI與PR、精子濃度、精子正常形態(tài)率、精子存活率均呈負相關(guān)性，在不育癥患者病情評估中具有重要的參考價值，值得借鑒[5]。

(二)精子線粒體檢測項目

MMP可反映精子質(zhì)量與線粒體功能之間的密切關(guān)系。早在1982年，Evenson等就發(fā)現(xiàn)弱精子癥患者精子MMP水平較低。研究進一步證實MMP與精子活力、正常形態(tài)之間存在相關(guān)性)。楊穎等報道弱精子組MMP低于對照組，且MMP與精子活動率、前向運動精子百分率及正常形態(tài)精子百分率呈正相關(guān)。Zhag等報道正常水平的精子MMP是維持精子頂體酶活性和染色質(zhì)完整性的生理基礎(chǔ)，MMP低的精子不易進行頂體反應(yīng)。因此，國外學者建議對不明原因不育夫婦且男方精子MMP水平較低時，采用卵細胞質(zhì)內(nèi)單精子注射技術(shù)(ICSI)治療。MMP和精子DNA碎片指數(shù)(DFI)聯(lián)合預(yù)測女性配偶自然受孕的能力優(yōu)于精液常規(guī)參數(shù)，是臨床評估特發(fā)性男性不育的重要指標[6]。

(三)精子頂體檢測項目

精子頂體酶活性可作為精子發(fā)生和精子質(zhì)量的分子標記，并與男性的生育潛力密切相關(guān)，可以與其他生物標志物聯(lián)合檢測，如精液參數(shù)和精子DNA碎片化指數(shù)，對提高男性不育癥的診斷敏感性及預(yù)測自然妊娠成功的能力起著至關(guān)重要的作用[7]。

(四)精子活性氧類物質(zhì)檢測項目

宋曉慶等[8]研究表明，精子DFI值與精子活性氧(ROS)水平存在正相關(guān)性，也提示精子DNA損傷可能是由于精液中氧化應(yīng)激反應(yīng)造成的。異常形態(tài)精子可能是產(chǎn)生氧自由基的重要來源，而高水平精子ROS與精子DNA碎片增多可能有關(guān)，它會加速生殖細胞的調(diào)亡、導致受精率降低等一系列不良后果。

適用科室

男科、生殖醫(yī)學科、泌尿外科、婦產(chǎn)科、不孕不育科、檢驗科

參考文獻

[1] 劉祎琳 and 董建軍, 男性不育癥患者精子DNA碎片指數(shù)檢測意義. 實用醫(yī)技雜志, 2024. 31(04): p. 237-240.
[2] 李紅林, 傅廣波, and 呂述彥, 精子線粒體功能檢測與男性不育相關(guān)性的研究進展. 臨床檢驗雜志, 2021. 39(04): p. 287-290.
[3] 邱小龍, et al., 精子頂體酶活性在男性生殖中的價值研究進展. 河北醫(yī)藥, 2024. 46(06): p. 914-918.
[4] 宋曉慶, et al., 精子活性氧類物質(zhì)與其形態(tài)及DNA碎片的相關(guān)性. 中國計劃生育學雜志, 2022. 30(02): p. 387-390.

指南共識

序號	指南/共識名稱	要點
1	《精子DNA碎片檢測的臨床專家共識》	精子DNA碎片(sperm DNA fragmentation,SDF)是一項新的反映精子功能的檢測指標。SDF增高常伴發(fā)少、弱精子癥，也可發(fā)生在精液常規(guī)指標正常的男性不育癥患者。SDF的發(fā)生機制復雜。很多文獻報道SDF升高與自然妊娠和輔助生殖技術(shù)結(jié)局存在負相關(guān)。因此，近年來SDF檢測已廣泛應(yīng)用于男性不育的診斷和治療。
2	《精子碎片實驗室檢測與臨床應(yīng)用專家共識——基于流式細胞精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析》	在過去的幾十年里，精子DNA碎片(SDF)檢測是一項經(jīng)受住時間考驗的精子功能研究技術(shù)，在全世界的男科實驗室中日益普及。各種體外和體內(nèi)研究都支持精子DNA完整性在受精、早期胚胎發(fā)育、植入和妊娠中的重要性。對于接受輔助生殖技術(shù)的患者，SDF已經(jīng)成為一種新的風險分層生物標志物。
3	《男性生育力評估中國專家共識》	MMP是反映精子線粒體功能的關(guān)鍵指標，反映了精子質(zhì)量與線粒體功能之間的密切關(guān)系。MMP影響精子的活力、獲能、AR（頂體反應(yīng)）和最終受精能力等。
4	《維生素E在男性不育中臨床應(yīng)用專家共識(2014版)》	過多的ROS可以直接氧化損傷生殖細胞及精子，引起精子結(jié)構(gòu)與功能改變，影響精液質(zhì)量。研究還發(fā)現(xiàn)ROS破壞精子DNA的完整性，干擾精卵融合，造成男性不育。
5	《臨床實驗室精液常規(guī)檢驗中國專家共識》	精子頂體的完整性是體外受精助孕成功的關(guān)鍵之一，頂體結(jié)構(gòu)不完整容易導致頂體反應(yīng)發(fā)生障礙，影響受精，甚至導致男性不育。