造血干細(xì)胞檢測(cè)試劑盒(流式細(xì)胞儀法)

--國(guó)際公認(rèn)的造血干細(xì)胞最精確的檢查方法，干細(xì)胞采集不佳的最可靠預(yù)測(cè)指標(biāo)

樣本類型：

校準(zhǔn)品：請(qǐng)根據(jù)所用流式細(xì)胞儀型號(hào)選用廠家要求配套的校準(zhǔn)品

質(zhì)控品：請(qǐng)根據(jù)所用流式細(xì)胞儀型號(hào)選用廠家推薦的質(zhì)控品

配套儀器：中生BioCyte、FlowCyte/ZS-AE7S、FACSCantoII、FACSCalibur、DxFLEX、Navios、NovoCyte、BriCyte E6等流式細(xì)胞儀

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指標(biāo)簡(jiǎn)介

造血干細(xì)胞（Hematopoietic Stem Cell，HSC）主要來(lái)源于骨髓、臍帶血和外周血，具有自我更新、多向分化潛能、歸巢潛能以及可塑性等特點(diǎn)，是發(fā)現(xiàn)最早、研究歷史最長(zhǎng)、臨床應(yīng)用最為廣泛的干細(xì)胞。臨床上通過(guò)造血干細(xì)胞移植（Hematopoietic Stem Cell Transplantation，HSCT）可幫助患者恢復(fù)造血功能，重建免疫系統(tǒng)。目前，HSC已在血液系統(tǒng)疾病、自身免疫疾病、某些實(shí)體瘤和基因缺陷疾病等多種疾病治療中顯示出巨大潛力。干細(xì)胞治療中在樣品采集、細(xì)胞分離與富集、細(xì)胞凍存與冷鏈運(yùn)輸、體外培養(yǎng)與擴(kuò)增、細(xì)胞回輸?shù)榷鄠€(gè)環(huán)節(jié)均涉及到細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)，準(zhǔn)確的HSC計(jì)數(shù)對(duì)于HSCT的成敗十分重要。在實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用領(lǐng)域，會(huì)把特異性高表達(dá)CD34的細(xì)胞歸類于HSC，流式細(xì)胞儀結(jié)合熒光單抗技術(shù)為HSC絕對(duì)計(jì)數(shù)提供了一種快速、定量、重復(fù)性好的方法，是目前國(guó)際公認(rèn)的造血干細(xì)胞最精確的檢查方法。

檢測(cè)原理

流式細(xì)胞儀法：待測(cè)樣本的細(xì)胞懸液，在鞘液的包圍和約束下，細(xì)胞排成單列高速由流動(dòng)室噴嘴噴出，形成細(xì)胞液柱。當(dāng)液柱通過(guò)檢測(cè)區(qū)，在入射的激光束照射下產(chǎn)生前向角散射光（FSC）和側(cè)向角散射光（SSC），它們分別反映細(xì)胞大小和顆粒度，根據(jù)這些特性可以將細(xì)胞分類。經(jīng)一種或幾種特殊熒光標(biāo)記的樣本，在激光束的激發(fā)下所產(chǎn)生的特定熒光，可被光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)并輸送到計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析，得到細(xì)胞相應(yīng)的各種特性。

臨床應(yīng)用

各種造血干細(xì)胞移植物的CD34+細(xì)胞劑量控制：BMT和PBSCT的CD34+細(xì)胞劑量>2×106/kg;臍血干細(xì)胞移植時(shí)，CD34+細(xì)胞劑量可少至BMT或者PBSCT的1/10，即2×106/kg。
化療強(qiáng)弱的掌握：化療后血象的恢復(fù)快慢取決于對(duì)造血干/祖細(xì)胞損傷的強(qiáng)度。CD34+細(xì)胞的測(cè)定可以判斷化療的強(qiáng)度，即要求化療強(qiáng)度控制在殺傷一定比例而非所有CD34+細(xì)胞。
貧血的鑒別(如再生障礙性貧血、缺鐵性貧血)：如果再障的原因?qū)儆诩?xì)胞受累，則CD34+細(xì)胞可以明顯降低(<0.01%)，缺鐵性貧血時(shí)，CD34+細(xì)胞數(shù)量應(yīng)在正常范圍之內(nèi)。
基因治療CD34+的HSC作為缺陷基因的靶細(xì)胞有它獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)镠SC具有自我更新的能力，因此，缺陷基因?qū)氪祟惣?xì)胞后能維持終身，從而徹底治愈疾病。治療過(guò)程中CD34+HSC的精確測(cè)定非常重要。
外周血造血干細(xì)胞(PBSC)采集前CD34陽(yáng)性細(xì)胞動(dòng)員有效性的監(jiān)測(cè)可以指導(dǎo)臨床制定采集計(jì)劃。如外周靜脈血有核細(xì)胞中CD34+細(xì)胞達(dá)到0.001(0.10%)以上時(shí)，可以考慮行PBSC單采術(shù)。否則，應(yīng)繼續(xù)動(dòng)員。

適用科室

血液科、腫瘤科等。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)免疫學(xué)會(huì)血液免疫分會(huì)臨床流式細(xì)胞術(shù)學(xué)組. CD34陽(yáng)性細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)的流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定指南[J]. 中華血液學(xué)雜志,2015,36(7):539-546.
[2] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì),中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)(CSCO)抗淋巴瘤聯(lián)盟. 淋巴瘤自體造血干細(xì)胞動(dòng)員和采集中國(guó)專家共識(shí)(2020年版)[J]. 中華血液學(xué)雜志,2020,41(12):979-983.
[3] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì)造血干細(xì)胞應(yīng)用學(xué)組. 成人急性白血病自體造血干細(xì)胞移植中國(guó)專家共識(shí)(2024年版)[J]. 中華血液學(xué)雜志,2024,45(7):637-644.>

指南共識(shí)

序號(hào)	指南/共識(shí)名稱	要點(diǎn)
1	《CD34陽(yáng)性細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)的流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定指南》（2015）	20世紀(jì)80年代，CD34分子在造血祖細(xì)胞上表達(dá)的發(fā)現(xiàn)，為臨床HSCT提供了可評(píng)估植入最低閾值的強(qiáng)有力工具。大量的臨床研究證實(shí)用富含CD34細(xì)胞組分移植可安全、持久地獲得多系造血重建。因此，目前臨床及實(shí)驗(yàn)室仍然是應(yīng)用CD34細(xì)胞進(jìn)行HSCT、基因轉(zhuǎn)染和HPC擴(kuò)增，而流式細(xì)胞術(shù)計(jì)數(shù)CD34*細(xì)胞因具有快速、簡(jiǎn)便、可定量等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于移植物中HSC/HPC數(shù)量的檢測(cè)及確定采集時(shí)機(jī)等。
2	《淋巴瘤自體造血干細(xì)胞動(dòng)員和采集中國(guó)專家共識(shí)（2020年版）》	研究顯示采集前的外周血CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)和最終干細(xì)胞采集量之間存在線性關(guān)系，因此被認(rèn)為是干細(xì)胞采集不佳的最可靠預(yù)測(cè)指標(biāo)。建議有條件的單位在采集前檢測(cè)外周血CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)以識(shí)別動(dòng)員不佳的患者。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD34細(xì)胞是評(píng)估干細(xì)胞數(shù)量的重要方法。正確判斷采集時(shí)機(jī)是獲得最大采集量的重要因素，目前證實(shí)最有效且臨床可行的方法是監(jiān)測(cè)外周血CD34+細(xì)胞數(shù)。
3	《成人急性白血病自體造血干細(xì)胞移植中國(guó)專家共識(shí)（2024年版）》	外周血干細(xì)胞動(dòng)員階段，推薦在造血恢復(fù)期每日監(jiān)測(cè)外周血白細(xì)胞和CD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)恢復(fù)至>5×109L或外周血CD34+細(xì)胞>0.02×109L時(shí)采集外周造血干細(xì)胞。自體造血干細(xì)胞和骨髓采集：CD34+細(xì)胞最低輸注量為2×106/kg)。盡管更高的CD34+細(xì)胞輸注量與更快的植入有關(guān)，但過(guò)高的CD34+細(xì)胞輸注量(>7×106/kg)可能增加疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。自體造血干細(xì)胞保存階段，復(fù)蘇后干細(xì)胞的質(zhì)控目前尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，有條件的單位可開展CD34+細(xì)胞的活率檢測(cè)。自體造血干細(xì)胞移植后造血重建的監(jiān)測(cè)：移值后造血重建的時(shí)間受回輸物中CD34+細(xì)胞數(shù)量、是否液氮凍存、DMSO濃度等多種因素影響。