調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)檢測(cè)試劑盒(流式細(xì)胞儀法)

--“免疫剎車”細(xì)胞，預(yù)警自身免疫病、腫瘤免疫逃逸及移植排斥風(fēng)險(xiǎn)

樣本類型：EDTA抗凝血

校準(zhǔn)品：請(qǐng)根據(jù)所用流式細(xì)胞儀型號(hào)選用廠家要求配套的校準(zhǔn)品

質(zhì)控品：請(qǐng)根據(jù)所用流式細(xì)胞儀型號(hào)選用廠家推薦的質(zhì)控品

配套儀器：中生BioCyte、FlowCyte/ZS-AE7S、FACSCantoII、FACSCalibur、DxFLEX、Navios、NovoCyte、BriCyte E6等流式細(xì)胞儀

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指標(biāo)簡(jiǎn)介

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)是一群起源于胸腺的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群，該類細(xì)胞占外周血、脾臟和淋巴組織CD4+T淋巴細(xì)胞的5-10%。Treg細(xì)胞發(fā)現(xiàn)于1995年由日本生物學(xué)家坂口志文教授發(fā)現(xiàn)并命名，發(fā)現(xiàn)將其去除，則會(huì)誘發(fā)小鼠自身免疫性疾??；若將其回輸，則阻止自身免疫性疾病的發(fā)生，因此命名為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory cell，簡(jiǎn)稱Treg）。Treg細(xì)胞主要通過(guò)分泌抑制性細(xì)胞因子或接觸抑制的方式抑制T細(xì)胞的活化和增殖，積極參與免疫自我耐受的維持，對(duì)抗不良免疫反應(yīng)，通過(guò)阻止過(guò)度的免疫反應(yīng)、炎癥和組織破壞來(lái)調(diào)節(jié)免疫穩(wěn)態(tài)，維持機(jī)體免疫平衡。Treg細(xì)胞是體內(nèi)一類重要的免疫細(xì)胞，對(duì)人體的免疫調(diào)控以及免疫穩(wěn)態(tài)的維持至關(guān)重要，其數(shù)量異?；蚬δ墚惓６紩?huì)對(duì)人體產(chǎn)生影響。通過(guò)檢測(cè) Treg 細(xì)胞可以幫助臨床評(píng)估患者機(jī)體的免疫狀態(tài)，此外，通過(guò)監(jiān)測(cè)Treg細(xì)胞的改變，有助于進(jìn)行藥物療效評(píng)價(jià)及預(yù)后分析，從而制定更為有效的治療方案。

檢測(cè)原理

流式細(xì)胞儀法：待測(cè)樣本的細(xì)胞懸液，在鞘液的包圍和約束下，細(xì)胞排成單列高速由流動(dòng)室噴嘴噴出，形成細(xì)胞液柱。當(dāng)液柱通過(guò)檢測(cè)區(qū)，在入射的激光束照射下產(chǎn)生前向角散射光（FSC）和側(cè)向角散射光（SSC），它們分別反映細(xì)胞大小和顆粒度，根據(jù)這些特性可以將細(xì)胞分類。經(jīng)一種或幾種特殊熒光標(biāo)記的樣本，在激光束的激發(fā)下所產(chǎn)生的特定熒光，可被光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)并輸送到計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析，得到細(xì)胞相應(yīng)的各種特性。

臨床應(yīng)用

Treg與腫瘤：Treg的主要功能是抑制自身免疫應(yīng)答，維持免疫平衡，避免過(guò)度的炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要的負(fù)向調(diào)控作用。在血液腫瘤中，Treg一方面可以通過(guò)抑制對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)來(lái)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng);另一方面也可通過(guò)抑制炎癥和防止可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)展的自身免疫反應(yīng)而發(fā)揮保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn)，多種類型的血液腫瘤患者Treg數(shù)量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸的發(fā)生[2]。對(duì)于非小細(xì)胞肺癌，II/IV期患者術(shù)后外周血 Treg 細(xì)胞的比例高于健康對(duì)照人群，研究結(jié)果提示 Treg 細(xì)胞比例與非小細(xì)胞肺癌病理分期及腫瘤負(fù)荷相關(guān)，晚期非小細(xì)胞肺癌患者外周血 Treg 細(xì)胞高水平與更差的臨床結(jié)局相關(guān)，因此，外周血 Treg細(xì)胞檢測(cè)具有很高的意義，為指導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌患者個(gè)體化治療方案的選擇提供了額外的參考[3]。
Treg與移植排斥反應(yīng)：調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是機(jī)體建立免疫耐受的重要抑制性免疫細(xì)胞，在調(diào)控機(jī)體過(guò)度免疫應(yīng)答和自身免疫性疾病中發(fā)揮著重要作用。在移植免疫耐受相關(guān)研究中，增加體內(nèi)Treg數(shù)量或增強(qiáng)其功能已被證明是一種能夠誘導(dǎo)移植免疫耐受的治療策略[4]。Treg細(xì)胞在移植早期通常比例非常低，移植晚期逐漸增多[2]。多項(xiàng)臨床研究表明，移植術(shù)后發(fā)生排斥反應(yīng)的患者觀察到Treg細(xì)胞的顯著性降低伴隨效應(yīng)T細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的升高，提示術(shù)后進(jìn)行Treg細(xì)胞相關(guān)免疫監(jiān)測(cè)可能有助于預(yù)測(cè)排斥反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[3]。
Treg與感染：Treg細(xì)胞在感染早期或緩解期高表達(dá)，可以抑制免疫應(yīng)答，但卻延長(zhǎng)了慢性感染;發(fā)病后應(yīng)答能力下降，機(jī)體免疫應(yīng)答加強(qiáng)，以使機(jī)體加快清除病菌。動(dòng)態(tài)觀察Treg細(xì)胞可了解疾病的進(jìn)程與轉(zhuǎn)歸。
Treg與自身免疫性疾?。鹤陨砻庖咝约膊。缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)等，就是因?yàn)樽陨砻庖吡Τ１磉_(dá)，把機(jī)體正常組織當(dāng)作攻擊對(duì)象，造成機(jī)體的損害。Treg細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫反應(yīng)起到負(fù)性調(diào)節(jié)作用，抑制機(jī)體免疫反應(yīng)和對(duì)自身抗原的主動(dòng)耐受，從而避免自身免疫疾病的發(fā)生。Treg高表達(dá)，提示患者處于免疫抑制狀態(tài)，提示免疫抑制劑使用過(guò)量或者感染風(fēng)險(xiǎn)增加;Treg低表達(dá)，提示免疫抑制劑應(yīng)用不足、提示自身免疫性疾病發(fā)病期。通過(guò)監(jiān)控并調(diào)控Treg表達(dá)能夠指導(dǎo)免疫抑制劑的使用，控制亢進(jìn)的免疫功能，改善自身免疫性疾病患者整體預(yù)后。
Treg與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)：目前，Treg細(xì)胞在妊娠免疫耐受中發(fā)揮極其重要的作用，已被公認(rèn)為維持母胎免疫耐受的重要因素之一，其水平的降低與子癇前期、胎兒生長(zhǎng)受限和習(xí)慣性流產(chǎn)密切相關(guān)。與正常妊娠婦女相比，習(xí)慣性流產(chǎn)患者卵泡期Treg細(xì)胞數(shù)量和功能明顯下降。Treg細(xì)胞數(shù)量和功能的下降還與原因不明的復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)有關(guān)[3]。

適用科室

適用科室	適應(yīng)疾病
感染科	結(jié)核患者：外周血及感染灶中Treg細(xì)胞比例上升，可抑制抗原特異性T細(xì)胞分泌IFN-γ并削弱巨噬細(xì)胞對(duì)病原體的吞噬作用。 HIV患者：淋巴和黏膜組織中Treg細(xì)胞數(shù)量增加并且HIV特異性T細(xì)胞的分化受抑制，而外周血Treg細(xì)胞數(shù)量的減少提示抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療有效。瘧疾：惡性瘧原蟲通過(guò)誘導(dǎo)Treg細(xì)胞削弱了機(jī)體抗原特異性免疫反應(yīng)，從而促進(jìn)了寄生蟲血癥。
腫瘤科	在癌癥患者體內(nèi)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞活性升高，可以導(dǎo)致機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抗原耐受，從而使腫瘤細(xì)胞逃過(guò)機(jī)體的免疫殺傷，阻礙機(jī)體抑制癌細(xì)胞的增殖。對(duì)人和動(dòng)物模型的研究顯示，在腫瘤微環(huán)境中存在大量的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致不良預(yù)后。
血液科	在血液病及骨髓移植中，評(píng)估免疫抑制和移植物抗宿主病的風(fēng)險(xiǎn)
風(fēng)濕免疫科	系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）：活動(dòng)期外周血中Treg細(xì)胞表達(dá)增加，且與SLE分期相關(guān)。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）：患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量減少可能與 RA 的細(xì)胞免疫功能紊亂有關(guān)。自身免疫性肝炎：?jiǎn)魏思?xì)胞通過(guò)炎癥小體使Treg細(xì)胞呈現(xiàn)Th1/Th17表型并削弱其抑制功能哮喘患者：外周血中Treg細(xì)胞比例的上調(diào)提示病情加重。變應(yīng)性鼻炎：調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞可抑制第2組先天淋巴細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹突細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和B細(xì)胞，從而維持耐受性機(jī)制。
生殖中心	在生殖免疫領(lǐng)域，評(píng)估免疫因素對(duì)生育能力的影響
移植科	Treg細(xì)胞預(yù)防排斥反應(yīng)和建立免疫耐受主要通過(guò)減弱 T 細(xì)胞免疫反應(yīng)和控制炎癥來(lái)實(shí)現(xiàn)。急排臨床癥狀出現(xiàn)前1-5天，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞升高、CD4/CD8持續(xù)升高，預(yù)示急排；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和CD4/CD8持續(xù)降低，表明可能感染；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞繼續(xù)降低，CD4/CD8<0.2應(yīng)停用免疫抑制劑。

參考文獻(xiàn)

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[3] 劉錦鵬, 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化的性能驗(yàn)證方法研究. 2024, 中國(guó)醫(yī)科大學(xué).
[4] 胡露 and 粘燁琦, 從基礎(chǔ)研究到臨床實(shí)踐：調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在移植免疫耐受中的應(yīng)用研究進(jìn)展. 器官移植, 2023. 14(05): p. 745-753.
[5] 中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)師分會(huì), et al., 實(shí)體腫瘤外周血細(xì)胞免疫功能實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)專家共識(shí). 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2023(12): p. 1235-1248.
[6] 國(guó)家醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床醫(yī)學(xué)研究中心(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院), et al., 流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用專家共識(shí). 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2023(08): p. 792-801.

指南共識(shí)

序號(hào)	指南/共識(shí)名稱	要點(diǎn)
1	《淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤中應(yīng)用的專家共識(shí)（2023版）》[2]	Treg細(xì)胞的標(biāo)記為CD3+CD4+CD25+FoxP3或CD3+CD4+CD25+CD127lowW。T細(xì)胞表面CD127的低表達(dá)與T細(xì)胞質(zhì)內(nèi)FoxP3的高表達(dá)具有良好的相關(guān)性，且以CD127為標(biāo)志進(jìn)行檢測(cè)方法明顯優(yōu)于以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)FoxP3為標(biāo)志的檢測(cè)方法，因此也可以使用CD127替代FoxP3進(jìn)行Treg細(xì)胞的分析。
2	《實(shí)體腫瘤外周血細(xì)胞免疫功能實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)專家共識(shí)（2023版）》[5]	調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory Tcell,Treg細(xì)胞）:Treg細(xì)胞是CD4*T細(xì)胞的免疫負(fù)向調(diào)節(jié)亞群,通過(guò)接觸性抑制和分泌免疫抑制因子等途徑抑制CD4+T和CD8+T細(xì)胞的活化、增殖和效應(yīng)功能,從而抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答,以CD3+CD4+CD25+CD127-low或CD3+CD4+CD25+FoxP3+為分子標(biāo)記。
3	《流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用專家共識(shí)（2023版）》[6]	Treg檢測(cè)的單抗為CD4、CD25、CD3、CD127